伯樂S1000™梯度PCR儀是一款經典且性能穩定的儀器。其操作核心在于理解其物理旋鈕和顯示屏的交互方式，與現代全觸屏PCR儀有所不同。以下為您提供詳細的操作步驟、關鍵注意事項和實用技巧。

一、伯樂S1000梯度PCR儀操作前準備

1、儀器檢查：

確認電源線連接牢固，電源開關位于“OFF"狀態（位于儀器背面）。

打開儀器頂蓋，檢查樣品槽是否干凈，無碎屑或殘留物。

2、編寫程序：

在電腦或實驗記錄本上預先寫好完整的PCR程序，包括：

預變性（通常94-95℃， 2-5分鐘）

循環階段（變性、退火、延伸的溫度和時間，循環次數）

梯度退火溫度（如果需要）：確定梯度范圍和實驗組數（S1000的梯度塊是橫向的，共12列）。

最終延伸（通常72℃， 5-10分鐘）

保溫（通常4℃或10℃， ∞）

3、樣品準備：

在冰上配制PCR反應體系，并分裝到0.2ml的薄壁PCR管中。

蓋緊管蓋，防止加熱過程中液體蒸發和凝結。

短暫離心收集液體至管底。

二、伯樂S1000梯度PCR儀操作步驟

1、開機與放置樣品

（1）接通電源，打開儀器背面的主電源開關。

（2）按下儀器正面左下角的銀色按鈕，打開頂蓋。

（3）將裝有樣品的PCR管垂直、緊密地放入熱槽中。如果樣品數少，盡量對稱放置以獲得均勻的熱效應。

（4）務必蓋緊頂蓋。

2、創建或調用程序

（1）按 RUN/ENTER 鍵進入主菜單。

（2）旋轉旋鈕，使屏幕光標選擇 “PROG"（程序）。

（3）按 RUN/ENTER 確認。

新建程序：旋轉旋鈕選擇 “NEW"，按 RUN/ENTER。

調用舊程序：旋轉旋鈕選擇已存儲的程序號（1-9），按 RUN/ENTER。

3、設置程序參數

（1）屏幕顯示 “STEP 1"。旋轉旋鈕設置溫度，按 RUN/ENTER 確認。

（2）旋轉旋鈕設置時間（分鐘:秒），按 RUN/ENTER 確認。儀器會自動進入 “STEP 2"。

（3）重復以上步驟，設置所有循環步驟（變性、退火、延伸）。對于循環內的步驟，系統會提示您設置循環次數。

（4）設置最后的保溫步驟（通常設為4℃）。時間可設為“∞"或一個較長的時間。

4、設置梯度（關鍵步驟）

（1）在設置退火步驟的溫度時，按 GRAD 鍵，屏幕會顯示梯度設置界面。

（2）設置上限溫度：屏幕通常先指示“Grad Top"。旋轉旋鈕設置梯度一側的MAX溫度，按 RUN/ENTER 確認。

（3）設置下限溫度：屏幕指示變為“Grad Bot"。旋轉旋鈕設置梯度另一側的低溫度，按 RUN/ENTER 確認。

（4）重要：儀器會自動在左右兩端的樣品列之間生成一個線性的溫度梯度。中間各列的溫度是自動計算生成的。請將您的樣品按照實驗設計放入對應的列中。

（5）再次按 GRAD 鍵退出梯度設置模式，繼續設置該退火步驟的時間。

5、保存與運行程序

（1）所有步驟設置完畢后，按 RUN/ENTER。

（2）旋轉旋鈕選擇 “SAVE"，按 RUN/ENTER。

（3）旋轉旋鈕為程序選擇一個編號（1-9），按 RUN/ENTER 保存。

（4）返回主界面或程序就緒界面后，按下 START/STOP 鍵，儀器開始運行。您會聽到蜂鳴器提示，并看到狀態變為“RUN"。

6、運行結束

（1）程序完成后，蜂鳴器會響起，狀態顯示為“IDLE"（空閑）并停留在最終保溫溫度。

（2）按 START/STOP 鍵可以停止蜂鳴。

（3）打開頂蓋，盡快取出樣品進行后續分析或置于冰上。

三、關鍵注意事項

1、梯度方向：伯樂S1000的梯度是橫向的（從左到右）。請確保您清楚知道從左到右每一列對應的實際溫度，并在放置樣品管和記錄時對應好。

2、管蓋緊閉：這是防止蒸發和污染的最重要步驟。

3、熱蓋溫度：S1000的熱蓋溫度通常是固定的（~105℃），用于防止管蓋內冷凝，無需手動設置。確保熱蓋清潔且與管蓋接觸良好。

4、程序驗證：在按START前，務必通過旋鈕瀏覽一遍已設置的程序，確認所有溫度、時間和梯度設置無誤。

5、緊急停止：運行過程中如需停止，直接按 START/STOP 鍵，儀器會停止加熱并進入空閑狀態。

四、常見問題

1、屏幕不亮/無反應：檢查背面的主電源開關和電源線是否接通。

2、溫度不穩定或報錯：可能是儀器需要校準或存在硬件故障，請叫維修工程師。

3、梯度效果不理想：檢查樣品管是否對稱放置、體積是否一致、熱蓋是否蓋緊。

建議：使用時，強烈建議用水或模擬反應體系進行一次全流程操作演練，并記錄下梯度各列的實際溫度（可用熱電偶溫度計測量），以熟悉流程和驗證儀器狀態。