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伯樂Bio-Rad CFX Opus 96實時熒光定量PCR儀實驗所需的耗材和試劑。這臺儀器是qPCR實驗的核心設(shè)備,要完成一個完整的實驗,需要以下一系列的耗材和試劑。我們可以將其分為三大部分:核心耗材、實驗試劑、輔助耗材。
一、伯樂CFX OPUS96實時熒光定量PCR儀核心耗材
這些是直接用于儀器運行和信號檢測的消耗品。
1、qPCR反應(yīng)板/八聯(lián)管
(1)96孔光學(xué)反應(yīng)板:這是常用的耗材,專為CFX Opus 96的光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計。板子必須是光學(xué)平蓋或使用光學(xué)封板膜,以確保激光能準(zhǔn)確激發(fā)熒光并接收信號。
(2)透明封板膜:用于密封96孔板,防止實驗過程中液體蒸發(fā)和交叉污染。務(wù)必選擇與您的儀器兼容的高質(zhì)量封板膜。
(3)八聯(lián)管與管蓋:如果您不想使用整塊板,也可以使用獨立的八聯(lián)管和相應(yīng)的透明管蓋。這對于優(yōu)化反應(yīng)條件或樣本量少時非常方便。
重要提示:伯樂儀器對耗材有優(yōu)化建議。使用伯樂原廠或推薦品牌的耗材可以獲得良好的光學(xué)性能和熱傳導(dǎo)效率。
2、校準(zhǔn)板
CFX Opus 96通常需要一塊光學(xué)校準(zhǔn)板。這臺儀器在出廠時已校準(zhǔn),但根據(jù)實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序,可能需要定期或在移動儀器后進(jìn)行校準(zhǔn)。請參考儀器手冊確認(rèn)您是否需要以及何時需要使用。
二、伯樂CFX OPUS96實時熒光定量PCR儀實驗試劑
這些是進(jìn)行qPCR化學(xué)反應(yīng)所必需的生化成分。
1、PCR預(yù)混液
這是核心試劑,通常以2x濃度的形式提供,包含了進(jìn)行高效、特異性PCR擴(kuò)增所需的所有成分(除了引物、探針和模板DNA/cDNA)。
(1)主要成分包括:
熱啟動DNA聚合酶:提高反應(yīng)特異性和靈敏度。
dNTPs:合成DNA的原料。
MgCl?:聚合酶必需的輔因子。
緩沖鹽:提供良好的反應(yīng)pH環(huán)境。
穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑。
(2)選擇類型:
SYBR Green預(yù)混液:適用于使用SYBR Green染料法進(jìn)行實驗。染料會嵌入所有雙鏈DNA中發(fā)出熒光。
TaqMan探針預(yù)混液:適用于使用水解探針法(如TaqMan)進(jìn)行實驗。這種預(yù)混液針對探針法的5‘-3’外切酶活性進(jìn)行了優(yōu)化。
2、物和探針
(1)引物:一對特異性引物,用于擴(kuò)增您的目標(biāo)基因。
對于SYBR Green法,只需要一對引物。對于TaqMan探針法,除了引物,還需要一條熒光標(biāo)記的探針。
(2)探針:通常是兩端分別標(biāo)記有報告熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)的寡核苷酸探針。
3、模板核酸
(1)DNA:用于基因分型或病原體檢測。
(2)cDNA:由RNA經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄 反應(yīng)合成,用于基因表達(dá)分析。
4、無核酸酶水
用于稀釋和配制反應(yīng)體系,確保不會引入外源核酸酶降解您的試劑和樣本。
5、陽性對照和陰性對照
(1)陽性對照:含有已知目標(biāo)序列的模板,用于驗證整個實驗體系的有效性。
(2)無模板對照:用水代替模板,用于檢測試劑或環(huán)境中是否存在污染。
6、標(biāo)準(zhǔn)品
如果您需要進(jìn)行定量,則需要一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(例如,含有目標(biāo)基因的質(zhì)粒DNA或合成寡核苷酸梯度稀釋液),用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
三、輔助耗材與工具
這些是實驗準(zhǔn)備過程中物品。
1、移液器和無菌帶濾芯吸頭:用于精確移取液體,帶濾芯的吸頭可以防止氣溶膠污染和交叉污染。
2、渦旋混合儀和微型離心機(jī):用于混勻試劑和離心收集管壁上的液滴。
3、冰盒:用于在準(zhǔn)備反應(yīng)時保持試劑的低溫狀態(tài)。
4、無塵紙/酒精:用于清潔工作臺面,防止污染。