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賽默飛7500實時熒光定量PCR儀是一款在高校生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)學(xué)等研究領(lǐng)域中應(yīng)用非常廣泛的核心設(shè)備。它本身是一個功能強大的“檢測平臺",能夠執(zhí)行的實驗項目取決于您設(shè)計的實驗和使用的試劑。簡單來說,只要實驗的最終目的是對特定核酸(DNA或cDNA)進(jìn)行精確定量和檢測,都可以使用7500來實現(xiàn)。以下是它在高校中常見的、具體的實驗項目分類和舉例:
一、賽默飛7500實時熒光定量PCR核心應(yīng)用領(lǐng)域
1、基因表達(dá)分析
這是qPCR經(jīng)典、廣泛的應(yīng)用。通過檢測樣品中特定基因的mRNA水平(經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA),來研究基因在何種條件下、何種組織中表達(dá)。
研究案例:
醫(yī)學(xué)/生物學(xué): 研究某種藥物處理細(xì)胞后,癌基因(如p53)或炎癥因子(如IL-6, TNF-α)的表達(dá)變化。
植物學(xué): 研究植物在干旱、鹽堿脅迫下,相關(guān)抗逆基因的表達(dá)模式。
發(fā)育生物學(xué): 分析不同胚胎發(fā)育階段關(guān)鍵調(diào)控基因的表達(dá)量差異。
2、微生物檢測與鑒定
利用物種特異性的引物探針,對微生物進(jìn)行定性和定量分析。
研究案例:
環(huán)境科學(xué): 檢測水體或土壤中特定功能微生物(如硝化細(xì)菌、降解石油的細(xì)菌)的豐度。
食品科學(xué): 快速檢測食品中的致病菌,如沙門氏菌、李斯特菌。
醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究: 分析腸道微生物群落中某種特定菌群的比例變化。
3、在轉(zhuǎn)基因作物或動物的研究中,用于確認(rèn)外源基因是否成功整合并進(jìn)行表達(dá)。
研究案例:
農(nóng)學(xué): 檢測轉(zhuǎn)基因大豆、玉米中特定外源基因(如抗蟲Bt基因)的拷貝數(shù)和表達(dá)水平。
生物技術(shù): 在構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小鼠模型后,鑒定其基因型。
4、微小RNA(miRNA)表達(dá)分析
miRNA是重要的基因調(diào)控因子。由于其片段短,需要特殊設(shè)計的莖環(huán)法引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和檢測,qPCR是研究其表達(dá)的金標(biāo)準(zhǔn)方法。
研究案例:
癌癥研究: 分析腫瘤組織中特定的致癌或抑癌miRNA(如miR-21, let-7家族)的表達(dá)水平,作為潛在的生物標(biāo)志物。
5、病毒載量定量
精確測定患者血清或細(xì)胞培養(yǎng)物中病毒的拷貝數(shù),是病毒學(xué)研究和新藥評估的關(guān)鍵。
研究案例:
醫(yī)學(xué)/病毒學(xué): 研究抗病物對乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)或單純皰疹病毒(HSV)復(fù)制的影響。
二、7500實時熒光定量PCR實驗技術(shù)類型
在7500上,這些應(yīng)用通常通過以下幾種技術(shù)模式實現(xiàn):
1、SYBR Green染料法:
原理: 染料非特異性地嵌入雙鏈DNA,發(fā)出熒光。
優(yōu)點: 成本低,使用方便。
缺點: 特異性稍差,容易受非特異性擴增和引物二聚體影響。
適用項目: 快速的基因表達(dá)篩查、基因型鑒定(配合熔解曲線分析)。
2、TaqMan探針法:
原理: 使用一個序列特異性的熒光探針,特異性高,準(zhǔn)確性好。
優(yōu)點: 特異性高,適合多重PCR。
缺點: 探針合成成本較高。
適用項目: SNP分型、病原體定量、多重基因表達(dá)分析。
三、總結(jié)
總而言之,賽默飛7500實時熒光定量PCR儀在高校實驗室中是一個通用型核酸定量工具。它可以服務(wù)于:
1、基礎(chǔ)生物學(xué)研究(基因功能、信號通路)
2、醫(yī)學(xué)研究(疾病機制、生物標(biāo)志物、藥物靶點)
3、農(nóng)學(xué)研究(作物育種、抗逆機理)
4、環(huán)境科學(xué)研究(微生物生態(tài))
5、食品科學(xué)(安全檢測)
最終決定它能檢測什么項目的,是您的研究課題、實驗設(shè)計和所使用的引物/探針。 在開始實驗前,請務(wù)必查閱相關(guān)領(lǐng)域的實驗方案,并完成引物探針的優(yōu)化與驗證。