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使用Qubit 4.0熒光計(Thermo Fisher Scientific)相比傳統的紫外分光光度計(如NanoDrop)或其他熒光定量方法,具有以下優勢,適用于特定的實驗需求:
一、高特異性和準確性
1、僅檢測目標分子:Qubit使用熒光染料(如dsDNA HS/BR、RNA HS染料)特異性結合目標分子(如雙鏈DNA、RNA或蛋白質),避免雜質干擾(如游離核苷酸、單鏈DNA、鹽離子或蛋白質污染)。
對比NanoDrop:紫外吸收法(260 nm)會檢測所有核酸(包括降解片段和污染物),導致濃度高估。
2、低檢測限:
DNA檢測范圍:0.2–1000 pg/μL(高靈敏度模式),適合痕量樣本(如單細胞測序、cfDNA、微量提取產物)。
蛋白質檢測范圍:0.05–5 mg/mL(Protein Assay)。
二、操作簡便且快速
1、無需稀釋:
直接測量1–20 μL原始樣本,無需像紫外法那樣多次稀釋調整吸光度。
2、一鍵式操作:
觸摸屏界面選擇檢測類型(如dsDNA、RNA、Protein),加載樣本后3秒內出結果。
3、內置計算器:
自動計算試劑用量、檢測范圍,支持摩爾濃度轉換和樣本歸一化。
三、適用于低濃度或復雜樣本
1、熒光法的優勢:
在以下場景比紫外法更可靠:
樣本濃度極低(如微量DNA文庫、環境DNA)。
樣本中含污染物(如胍鹽、酚、肝素)。
需要區分DNA和RNA(如RNA-seq前的質控)。
2、兼容多種試劑盒:
Qubit 4.0支持多種預優化試劑盒(如BR/HS染料),覆蓋不同濃度需求。
四、數據管理和合規性
存儲和導出:
可存儲10,000組數據,支持USB/Wi-Fi導出,符合GLP/GMP要求。
21 CFR Part 11合規選項:
升級固件后支持電子簽名和審計追蹤(需SAE模式)。
五、何時選擇Qubit 4.0?
1、需要高精度的核酸/蛋白質定量(如qPCR、NGS文庫構建)。
2、樣本濃度低或含污染物。
3、避免紫外法對降解核酸的誤判。
若需更高通量,則選擇Qubit Flex。兩者核心檢測原理一致,Flex在效率上更優。